Relacionar glucosa con la levadura (practica)

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Relacionar glucosa con la levadura (practica)

anquero123

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Hola, mi practica se trata de lo siguiente y no entiendo que es lo que quieren que veamos:

"Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de los inhibidores de la cadena de transporte de electrones y de los desacoplantes"

Objetivos:

1.- Relacionar el consumo de glucosa con los cambios de pH producidos por las levaduras
2.- Describir las vías por las cuales la glucosa genera cambios de pH
3.- Interpretra el efecto de los inhibidores y los desacoplantes sobre la salida de protones
4.- Saber cuales son los productos finales del catabolismo de los carbohidratos en las levaduras
5.- Describir el efecto de los inhibidores de la cadena respiratoria de los sitios I, II y III sobre el consumo de O2 y la sintesis de ATP
6.- Entender el mecanismo por el cual los protonóforos desacoplan la fosforlización oxidativa; describiendo su efecto sobre el consumo de O2 y la síntesis de ATP

Las levaduras son las "Saccharomyces cerevisiae"

Hipotesis:

Si las levaduras consumen glucosa, se observará una disminución progresiva de su concentración en el medio de cultivo con el tiempo y cambios de pH extracelular

Método:

Experimento 1 (control)
1 .Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Determinar el pH de la solución y repetir la medición dos veces más con intervalos de 3 minutos para obtener la línea basal.
3. Adicionar 5 ml de glucosa a 10 %, agitar y medir el pH.
4. Determinar el pH de la solución cada 5 minutos 4 veces, y luego cada 10 minutos 2 veces más.

EXPERIMENTO 2 (DINITROFENOL)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Añadir por decantación (no pipetear) 0.2 ml de la solución de dinitrofenol 40 mmol/l, concentración final de 200 μmol/l.
3. Determinar el pH de la solución y repetir la medición dos veces más con intervalos de 3 minutos para obtener la línea basal.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.

EXPERIMENTO 3 (AZIDA)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Añadir por decantación (no pipetear) 0.5 ml de la solución de azida de sodio 400 mmol/l, concentración final de 5 mmol/l. Agitar con cuidado.
3. Determinar el pH de la solución y repetir la medición dos veces más con intervalos de 3 minutos para obtener la línea basal.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
6. Registrar sus datos en una tabla con minutos, glucosa, y ph de diniferol y pH de azida

Análisis de resultados
1. Hacer una gráfica de cada uno de los experimentos; utilizar los valores de las lecturas de pH contra tiempo.
2. Analizar el significado de los cambios de pH en el experimento control, con dinitrofenol como desacoplante y con azida de sodio.
3. Hacer una relación de las vías que producen estos cambios; tomar en cuenta que las levaduras poseen una ATPasa de protones en la membrana mitocondrial que se encarga de sintetizar ATP y que tienen otra ATPasa de protones en la membrana plasmática cuya función es similar a la bomba de Na+/K+ en las células de los mamíferos.


QUE DEBO y TENGO QUE SABER PARA HACER BIEN MI PRACTICA?
 
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